Chromatografia na tenkej vrstve je metóda chemickej analýzy založená na použití vrstvy sorbentu s hrúbkou 0,1 - 0,5 mm ako stacionárnej fázy. Metódu TLC možno použiť v rôznych oblastiach a umožňuje stanovenie širokej škály chemických zlúčenín.
Princíp metódy
Metóda tenkovrstvovej chromatografie sa zrodila z papierovej chromatografie a prvé experimenty sa uskutočňovali v 80. rokoch 19. storočia. Aktívne využitie tejto analýzy sa začalo až po roku 1938.
TLC technika zahrnuje mobilnú fázu (eluent), stacionárnu fázu (sorbent) a analyt. Stacionárna fáza sa nanesie a zafixuje na špeciálnu dosku. Doska môže byť vyrobená zo skla, hliníka alebo plastu - ide o opakovane použiteľné podklady, ktoré je potrebné po každom použití dôkladne umyť, vysušiť a pripraviť na aplikáciu sorbentu. Je tiež možné použiť papierové taniere, ktoré sa po použití zlikvidujú.
Ako stacionárna fáza sa najčastejšie používa silikagél, ale je možné použiť aj iné sorbenty, napríklad oxid hlinitý. Pri použití tohto alebo toho sorbentu je potrebné dôsledne dodržiavať technológiu, aby bol výsledok presný, napríklad pretože silikagél môže poskytnúť nesprávny výsledok, ak je vzduch v laboratóriu príliš vlhký.
Ako mobilná fáza sa používajú rozpúšťadlá, napríklad voda, kyselina octová, etanol, acetón, benzén. Výber rozpúšťadla je potrebné brať zodpovedne, pretože výsledok chromatografie priamo závisí od jeho vlastností (viskozita, hustota, čistota). Pre každú analyzovanú vzorku je vybrané individuálne rozpúšťadlo.
Analýza
Vzorka musí byť zriedená v rozpúšťadle. Ak nedôjde k úplnému rozpusteniu a zostane príliš veľa nečistôt, je možné vzorku vyčistiť extrakciou.
Aplikácia vzorky na platňu sa môže vykonať automaticky alebo manuálne. Automatická aplikácia využíva mikrosprejovú metódu, pri ktorej sa každá vzorka nastrieka na príslušnú oblasť podkladu. Na manuálnu aplikáciu sa používa mikropipeta. Pre každú vzorku sú na doštičke umiestnené značky ceruzkou. Každá vzorka sa nanesie kapilárou na dosku v jednej línii v dostatočnej vzdialenosti od značiek, aby nereagovala s uhlíkom z olova.
Doštička sa umiestni do nádoby, na spodok ktorej sa naleje eluent. Podpora je umiestnená jedným okrajom do cievy až po vyznačenú čiaru. Nádoba je tesne uzavretá, aby sa zabránilo odpareniu mobilnej fázy. Pôsobením kapilárnych síl začne eluent stúpať hore vrstvou sorbentu. Keď eluent dosiahne určitú hladinu, platňa sa vyberie z nádoby a vysuší sa.
Ak požadovaná látka nemá žiadnu farbu, nebude ju na podklade vidieť. Preto sa vykonáva vizualizácia - spracovanie platne parami jódu alebo inými farbivami.
Po takomto spracovaní sa vyhodnotí výsledok. Na sorbente sa objavujú farebné plochy rôznej intenzity. Na stanovenie látky (alebo skupiny látok) sa farebné plochy, ich veľkosť, intenzita a mobilita porovnajú s referenčnou vzorkou.
Metóda TLC je široko používaná, pretože je rýchla, lacná, presná, intuitívna, nevyžaduje zložité vybavenie a je ľahko interpretovateľná.
